第171章 169非要冲上来挨顿毒打
第171章169.非要冲上来挨顿毒打
第二天，秦志峰还在病房忙呢，老师乔梁平就给他打来了电话，“你现在来一趟吧，咱们去找张主任汇报下工作。”
乔梁平想了一夜，决定服软了，没办法，他是快退休了，可还有这么多弟子在这呢，万一张主任真的不讲武德，那他们的处境恐怕会很艰难。
可千万不要小看一个大型三甲医院科主任的能力，你只要你在这个科室里面，他想收拾伱是很轻松的事情，光职称晋升这一块就能把你卡的死死的。
“老乔，你这是？”张主任明知故问道。
“张主任，我糊涂啊。”乔梁平一脸后悔道，“我当时是起了妒忌之心，这才在协会乱说的，这几天我反思了一下，觉得自己的问题很严重，特意过来向你负荆请罪。”
“你看看你，这说的什么话。”张主任笑眯眯道，“我知道你肯定也是为了协会考虑，不过的确是有点考虑不周，这也不是什么大问题嘛。”
“只要及时改正就行了。”
“那我现在就给沈主任打个电话，认个错。”乔梁平说道，他是彻底的不要面子了，没办法，挨打就要立正，这是态度问题，要么死扛，要么就老老实实的服软。
“那没必要，我跟她说一声就行了。”张主任算是给他留了几分颜面。
“那太麻烦张主任了。“乔梁平这会一点心气也没了，“志峰这个带组的事..”
“今年不行了，名额都给老袁了。”张主任出声道，“等明年吧，我先给你签个字，你一会儿拿过去交给医教部。”
出了门，乔梁平感觉好多了，“都是老师的错，没事到处乱树敌，害的你又耽误了一年。”
“就一年，我等得起。”秦志峰松了一口气，他心里倒是没有责怪老师的意思。
沈主任很快就接到了张主任的电话，“这个老张，挺有一套的嘛。”她笑着对赵主任说，“那个乔主任，还敢在我面前倚老卖老，真是给他脸了。”
“就是，明明跟他一毛钱关系都没有，非要冲上来挨顿毒打。张主任的手段我可是听说过的，肯定被收拾的不轻。”赵主任随口说道。
——
X乡这边，胡嘉然正在实验室里面发愁，他们遇到了难题。
融合用饲养层细胞制备还算比较顺利，腹腔巨噬细胞来源方便并且制备简单，最重要的是其中的巨噬细胞具有清除死亡细胞和吞噬细胞碎片的能力，因此一般融合时会选择腹腔巨噬细胞作为饲养层细胞。
“取7～8周龄雌鼠脱颈椎处死，于70%酒精浸泡消毒，然后超净工作台内用无菌手术剪将小鼠腹部剪开一个小口，镊子剥离周围皮肤以便露出腹腔；”
弃上清，加入1ml完全培养基重悬细胞，然后稀释至所需用量体积，加入到96孔板；
这一步就算完成了。
接下来是免疫鼠脾细胞的准备，这一步虽然不容易，但也没能对胡嘉然他们造成太大的困扰。
细胞融合当天需要取三天前冲击免疫过的小鼠作为免疫脾细胞的来源，一般情况下免疫小鼠的脾脏体积大小是正常小鼠的两倍。
“在超净工作台内用高压灭菌好的手术剪将小鼠胸腔左下侧开一个小口，用镊子摘取脾脏后放于含3~5ml不完全培养基的皿中，剔除周围结缔组织，将脾脏转移至润湿的0.4目筛网中用研磨棒轻柔研磨，加入适量预冷的不完.”
原来胡嘉然挺高兴的，但没想到在融合的时候遇到了麻烦。
高风给的实验流程中是要将骨髓瘤细胞和免疫鼠脾细胞进行融合，可他们进行了多次的实验，结果均以失败告终。
“我感觉是比例的问题。”岳鹏辉说道，“两种细胞的比例在融合的时候起着很关键的作用。”
“还有温度！”一个叫王伟的说道，他是研究生学历，基本功很扎实，胡嘉然早就注意到了这个人。
“还有搅拌的速率。”刚来不到1个月的徐兵也发表了意见，“过快的搅拌速率会导致脾细胞破裂，太慢的话又容易凝固，我觉得速度为25r/min最为合适。”
众人都七嘴八舌的说了起来，实验到这个地方卡住了，都1周多了，一点进度也没有，大家都很着急。
“说的都挺有道理。”胡嘉然做了总结，“那接下来该怎么办呢？”
“能怎么干啊？往死里干呗。”王亮喊了起来，“四点睡，六点起，阎王夸我好身体！”
胡嘉然突然对这个逗比满意极了，“加班费发双倍的。”他同时使出了无坚不摧的钞能力。
半月后
“这两天放假，大家好好歇歇。”胡嘉然很兴奋，但声音中明显透露着一股子虚弱。
他强打精神，开始把实验的详细流程给记录了下来：
充分打散沉淀，将1ml经过32℃预热的50%PEG匀速加入离心管中（用1ml的移液器，5min内加完），期间用移液器枪头轻柔搅拌；
持续缓慢的用枪头搅拌3~4分钟；
匀速加入1ml经过37℃预热的不完全培养基（1min内加完），期间用移液器枪头轻柔搅拌；
再匀速加入3ml经过37℃预热的培养基（3min内加完），期间用移液器枪头轻柔搅拌；
融合后24小时内补加含HAT的选择性补液培养基，50μl/well；
补液两天后进行第一次半换液，每孔吸出60～80μl的培养基，第一次半换液培养基内HAT含量减半，50μl/well；
再过两天后进行第二次半换液，每孔吸出60～80μl培养基，换成含HT的培养基，50μl/well。
“你要不歇歇再弄吧。”齐楠楠在一旁劝道，“我这段时间真怕你猝死了。”
“怎么可能？”胡嘉然头都没有抬，“我虎着呢。还有，齐楠楠，我能不能给你提个建议啊？”
“你说。”
“就是你处死小白鼠的时候，能不能不要老是露出那种变态的笑容啊？”他嫌弃道，“连王亮那么变态的人都说你不正常。”
“有病吧，你们！”齐楠楠不乐意了，“我杀几个老鼠我招谁惹谁了？那下次我面无表情好了。”
——
王亮几人正在街边撸串，这边大学城人超级多，非常有生活气息。
“你们看这些女孩子，真的漂亮。”有人直流口水，“医学院女生多，不像咱们专业，一个系全是大老爷们，根本找不到对象。”
“是啊，我宿舍里面6个人，4年下来全是单身狗。”
“唉，本来想着毕业后能很快找一个女朋友呢，谁知道比上学时候还难呢，艹！”
“胡工不是说等项目完成了，给咱们找个公司联谊吗？”岳鹏辉眼中露着希冀，“要我说，省医的护士就行，长得漂亮的肯定很多。”
说起女生，男人嘴里永远不会缺少话题。
“马上到10号了，咱们工资也快发了吧。”有人说起了这个事，“我大概算了一下，要真是按胡工说的，那我这个月至少拿3万。”
“我跟你差不多啊。”几人说起这个兴致都很高。
“马上就发了。”王亮给大家透露道，“昨天我听到胡工给赵经理打电话了，提起了这个事，说要尽快发放，以提高大家的积极性。”
他说话的空隙拿起了手机查询了一下银行账户，“卧槽，发过了！”
听到他的话大家都不淡定了，纷纷查了起来，“我记得不是有一个什么到账提醒功能吗？就是有人给打钱，可以短信通知的。”
“那个得自己到银行开通短信提醒，一个月2块钱。”
“鹏辉，你发了多少钱？”王亮问道。
“个人隐私。”
“你大爷的隐私，快让我看看。”王亮伸手把他的手机拿了过去。
“43000？”王亮愣住了，“不是，这凭啥啊？你比我多了快1万块钱！”
“人家鹏辉关键的地方起了好大作用呢，哪像你一样，天天划水。”有人笑道，“我要是老板，早给你丫赶出去了。”
赵兴业今天上午的时候特意给高风打了个电话，胡嘉然给报过来的工资单着实让他大吃一惊，就这十几个人，一个月要花掉公司近80万，太夸张了！
“要不我过去审核一下？”他小声提议道。
“没必要，他们这个月加班多。”高风很随意的说道，“熬夜最容易掉头发了，这些人将来肯定要秃顶的。”
“我看你最近也是来回跑，挺辛苦的，不行给自己也涨点工资吧。”说完高风就挂断了电话。
赵兴业半天没回过神，他陷入了深深的怀疑之中，这老板到底什么情况啊？总感觉公司不是他开的。
“赶紧把杂交瘤细胞克隆化给做起来。”高风对胡嘉然说道，“这一步很重要，结果出来后，你第一时间把数据带回来给我，写文章要用的。”
胡嘉然本来想适当放慢下进度的，他真怕这些科研民工哪天猝死了，不过既然高风发话了，那大家还是得赶紧动起来。
鞭打快牛！
杂交瘤细胞的克隆化一般是指针对于抗体阳性孔的克隆化。在实际实验操作中，会有数个或者更多的克隆，其中可能包括所需的抗体分泌细胞，抗体非分泌细胞，及其他无关抗体的分泌细胞。克隆化的原则是，对于检测抗体阳性的杂交克隆尽早进行克隆化。
因为非抗体分泌细胞的生长速度比抗体分泌细胞的生长速度快，抗体分泌细胞的生长就会被抑制，最终二者的竞争结果会造成抗体分泌细胞的丢失。
目前，常用的细胞单克隆方法主要是以下二种：有限稀释法，流式细胞荧光分选技术。
有限稀释法是目前应用比较多的单克隆挑选方法，优点很明显，操作简单，对仪器设备的需求比较低，并且方便后续的工艺开发。
它的缺点也很明显，耗时较长，效率低，成本高，失误率高。由于该方法对人工依赖比较高，获得高单克隆率，需要多轮有限稀释。
流式细胞荧光分选技术根据细胞大小、荧光染料和细胞表面特点等因素挑选出所需要的单细胞，该技术已广泛应用于单细胞分离、稀有细胞分选等实验过程中。优点是操作简单，周期短，缺点是单克隆率具有不确定性。
根据细胞形态获得的单克隆细胞，会产生多个存在微小差异的细胞，这样的差异在传代扩增之后，依然会出现过度增殖，从而影响单克隆的纯粹性。
而高风给胡嘉然提供的是一种新的克隆方法，叫高通量设备自动化筛选，优点是人工干预少、通量大，其优势很明显，成本低，效率高，缺点则是对技术的要求比较高。
实验室里面的众人都没听说过这种方法，大家一脸的茫然。
“风哥，这个恐怕不行啊，你说的这个大家听都没听过，市面上也没有这种仪器卖。”胡嘉然给高风打电话，“我们研究了几天，真是没有头绪。”
“别慌，我现在就过去一趟。”高风没有着急，这个时候他也该亲自下场了。
“首先我们要构建一个自动化液体处理系统。”高风对一众科研民工讲道，“这种系统通常由多个液体处理单元组成，能够根据不同实验的需求，自动完成液体移液、混合等操作。自动化液体处理系统具有高精度、高速度、高可扩展性的特点，可以同时处理多个样品，能迅速提高筛选效率和准确性。”
“市面上暂时没有卖的，但咱们可以自己做一个，并不难，只需要把一些仪器集成到一块就行了。”他自信满满，这一步他在系统空间里面做过了，完全达到了系统的要求。
“这是图纸，你联系赵律师申请专利。还有，再买10台高速离心机.”临走的时候高风对胡嘉然交代道，“2周内把这个做出来，有编程和集成方面难题直接找专业人士，不要怕花钱，咱们不能再浪费时间了。”
胡嘉然压力挺大的，照目前的进度来看，三个月肯定是不行的，四个月能出来结果就烧高香了。
大家都忙的不行了，开工的时候买的发财树由于没人浇水，都已经枯死了。
看着全是黄叶的枯树，胡嘉然叹了口气，“不是说发财树耐旱吗？怎么就这么快死了呢？这兆头可不太好啊。”
“下班的时候找两个人给扔了吧。”
“发财树嘛，树死了，不就剩发财了吗？”王亮说道。
“好像是这么个道理.那先放这？”胡嘉然。
今天就一章了明天更一万字。
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第二天，秦志峰还在病房忙呢，老师乔梁平就给他打来了电话，“你现在来一趟吧，咱们去找张主任汇报下工作。”
乔梁平想了一夜，决定服软了，没办法，他是快退休了，可还有这么多弟子在这呢，万一张主任真的不讲武德，那他们的处境恐怕会很艰难。
可千万不要小看一个大型三甲医院科主任的能力，你只要你在这个科室里面，他想收拾伱是很轻松的事情，光职称晋升这一块就能把你卡的死死的。
“老乔，你这是？”张主任明知故问道。
“张主任，我糊涂啊。”乔梁平一脸后悔道，“我当时是起了妒忌之心，这才在协会乱说的，这几天我反思了一下，觉得自己的问题很严重，特意过来向你负荆请罪。”
“你看看你，这说的什么话。”张主任笑眯眯道，“我知道你肯定也是为了协会考虑，不过的确是有点考虑不周，这也不是什么大问题嘛。”
“只要及时改正就行了。”
“那我现在就给沈主任打个电话，认个错。”乔梁平说道，他是彻底的不要面子了，没办法，挨打就要立正，这是态度问题，要么死扛，要么就老老实实的服软。
“那没必要，我跟她说一声就行了。”张主任算是给他留了几分颜面。
“那太麻烦张主任了。“乔梁平这会一点心气也没了，“志峰这个带组的事..”
“今年不行了，名额都给老袁了。”张主任出声道，“等明年吧，我先给你签个字，你一会儿拿过去交给医教部。”
出了门，乔梁平感觉好多了，“都是老师的错，没事到处乱树敌，害的你又耽误了一年。”
“就一年，我等得起。”秦志峰松了一口气，他心里倒是没有责怪老师的意思。
沈主任很快就接到了张主任的电话，“这个老张，挺有一套的嘛。”她笑着对赵主任说，“那个乔主任，还敢在我面前倚老卖老，真是给他脸了。”
“就是，明明跟他一毛钱关系都没有，非要冲上来挨顿毒打。张主任的手段我可是听说过的，肯定被收拾的不轻。”赵主任随口说道。
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X乡这边，胡嘉然正在实验室里面发愁，他们遇到了难题。
融合用饲养层细胞制备还算比较顺利，腹腔巨噬细胞来源方便并且制备简单，最重要的是其中的巨噬细胞具有清除死亡细胞和吞噬细胞碎片的能力，因此一般融合时会选择腹腔巨噬细胞作为饲养层细胞。
“取7～8周龄雌鼠脱颈椎处死，于70%酒精浸泡消毒，然后超净工作台内用无菌手术剪将小鼠腹部剪开一个小口，镊子剥离周围皮肤以便露出腹腔；”
弃上清，加入1ml完全培养基重悬细胞，然后稀释至所需用量体积，加入到96孔板；
这一步就算完成了。
接下来是免疫鼠脾细胞的准备，这一步虽然不容易，但也没能对胡嘉然他们造成太大的困扰。
细胞融合当天需要取三天前冲击免疫过的小鼠作为免疫脾细胞的来源，一般情况下免疫小鼠的脾脏体积大小是正常小鼠的两倍。
“在超净工作台内用高压灭菌好的手术剪将小鼠胸腔左下侧开一个小口，用镊子摘取脾脏后放于含3~5ml不完全培养基的皿中，剔除周围结缔组织，将脾脏转移至润湿的0.4目筛网中用研磨棒轻柔研磨，加入适量预冷的不完.”
原来胡嘉然挺高兴的，但没想到在融合的时候遇到了麻烦。
高风给的实验流程中是要将骨髓瘤细胞和免疫鼠脾细胞进行融合，可他们进行了多次的实验，结果均以失败告终。
“我感觉是比例的问题。”岳鹏辉说道，“两种细胞的比例在融合的时候起着很关键的作用。”
“还有温度！”一个叫王伟的说道，他是研究生学历，基本功很扎实，胡嘉然早就注意到了这个人。
“还有搅拌的速率。”刚来不到1个月的徐兵也发表了意见，“过快的搅拌速率会导致脾细胞破裂，太慢的话又容易凝固，我觉得速度为25r/min最为合适。”
众人都七嘴八舌的说了起来，实验到这个地方卡住了，都1周多了，一点进度也没有，大家都很着急。
“说的都挺有道理。”胡嘉然做了总结，“那接下来该怎么办呢？”
“能怎么干啊？往死里干呗。”王亮喊了起来，“四点睡，六点起，阎王夸我好身体！”
胡嘉然突然对这个逗比满意极了，“加班费发双倍的。”他同时使出了无坚不摧的钞能力。
半月后
“这两天放假，大家好好歇歇。”胡嘉然很兴奋，但声音中明显透露着一股子虚弱。
他强打精神，开始把实验的详细流程给记录了下来：
充分打散沉淀，将1ml经过32℃预热的50%PEG匀速加入离心管中（用1ml的移液器，5min内加完），期间用移液器枪头轻柔搅拌；
持续缓慢的用枪头搅拌3~4分钟；
匀速加入1ml经过37℃预热的不完全培养基（1min内加完），期间用移液器枪头轻柔搅拌；
再匀速加入3ml经过37℃预热的培养基（3min内加完），期间用移液器枪头轻柔搅拌；
融合后24小时内补加含HAT的选择性补液培养基，50μl/well；
补液两天后进行第一次半换液，每孔吸出60～80μl的培养基，第一次半换液培养基内HAT含量减半，50μl/well；
再过两天后进行第二次半换液，每孔吸出60～80μl培养基，换成含HT的培养基，50μl/well。
“你要不歇歇再弄吧。”齐楠楠在一旁劝道，“我这段时间真怕你猝死了。”
“怎么可能？”胡嘉然头都没有抬，“我虎着呢。还有，齐楠楠，我能不能给你提个建议啊？”
“你说。”
“就是你处死小白鼠的时候，能不能不要老是露出那种变态的笑容啊？”他嫌弃道，“连王亮那么变态的人都说你不正常。”
“有病吧，你们！”齐楠楠不乐意了，“我杀几个老鼠我招谁惹谁了？那下次我面无表情好了。”
——
王亮几人正在街边撸串，这边大学城人超级多，非常有生活气息。
“你们看这些女孩子，真的漂亮。”有人直流口水，“医学院女生多，不像咱们专业，一个系全是大老爷们，根本找不到对象。”
“是啊，我宿舍里面6个人，4年下来全是单身狗。”
“唉，本来想着毕业后能很快找一个女朋友呢，谁知道比上学时候还难呢，艹！”
“胡工不是说等项目完成了，给咱们找个公司联谊吗？”岳鹏辉眼中露着希冀，“要我说，省医的护士就行，长得漂亮的肯定很多。”
说起女生，男人嘴里永远不会缺少话题。
“马上到10号了，咱们工资也快发了吧。”有人说起了这个事，“我大概算了一下，要真是按胡工说的，那我这个月至少拿3万。”
“我跟你差不多啊。”几人说起这个兴致都很高。
“马上就发了。”王亮给大家透露道，“昨天我听到胡工给赵经理打电话了，提起了这个事，说要尽快发放，以提高大家的积极性。”
他说话的空隙拿起了手机查询了一下银行账户，“卧槽，发过了！”
听到他的话大家都不淡定了，纷纷查了起来，“我记得不是有一个什么到账提醒功能吗？就是有人给打钱，可以短信通知的。”
“那个得自己到银行开通短信提醒，一个月2块钱。”
“鹏辉，你发了多少钱？”王亮问道。
“个人隐私。”
“你大爷的隐私，快让我看看。”王亮伸手把他的手机拿了过去。
“43000？”王亮愣住了，“不是，这凭啥啊？你比我多了快1万块钱！”
“人家鹏辉关键的地方起了好大作用呢，哪像你一样，天天划水。”有人笑道，“我要是老板，早给你丫赶出去了。”
赵兴业今天上午的时候特意给高风打了个电话，胡嘉然给报过来的工资单着实让他大吃一惊，就这十几个人，一个月要花掉公司近80万，太夸张了！
“要不我过去审核一下？”他小声提议道。
“没必要，他们这个月加班多。”高风很随意的说道，“熬夜最容易掉头发了，这些人将来肯定要秃顶的。”
“我看你最近也是来回跑，挺辛苦的，不行给自己也涨点工资吧。”说完高风就挂断了电话。
赵兴业半天没回过神，他陷入了深深的怀疑之中，这老板到底什么情况啊？总感觉公司不是他开的。
“赶紧把杂交瘤细胞克隆化给做起来。”高风对胡嘉然说道，“这一步很重要，结果出来后，你第一时间把数据带回来给我，写文章要用的。”
胡嘉然本来想适当放慢下进度的，他真怕这些科研民工哪天猝死了，不过既然高风发话了，那大家还是得赶紧动起来。
鞭打快牛！
杂交瘤细胞的克隆化一般是指针对于抗体阳性孔的克隆化。在实际实验操作中，会有数个或者更多的克隆，其中可能包括所需的抗体分泌细胞，抗体非分泌细胞，及其他无关抗体的分泌细胞。克隆化的原则是，对于检测抗体阳性的杂交克隆尽早进行克隆化。
因为非抗体分泌细胞的生长速度比抗体分泌细胞的生长速度快，抗体分泌细胞的生长就会被抑制，最终二者的竞争结果会造成抗体分泌细胞的丢失。
目前，常用的细胞单克隆方法主要是以下二种：有限稀释法，流式细胞荧光分选技术。
有限稀释法是目前应用比较多的单克隆挑选方法，优点很明显，操作简单，对仪器设备的需求比较低，并且方便后续的工艺开发。
它的缺点也很明显，耗时较长，效率低，成本高，失误率高。由于该方法对人工依赖比较高，获得高单克隆率，需要多轮有限稀释。
流式细胞荧光分选技术根据细胞大小、荧光染料和细胞表面特点等因素挑选出所需要的单细胞，该技术已广泛应用于单细胞分离、稀有细胞分选等实验过程中。优点是操作简单，周期短，缺点是单克隆率具有不确定性。
根据细胞形态获得的单克隆细胞，会产生多个存在微小差异的细胞，这样的差异在传代扩增之后，依然会出现过度增殖，从而影响单克隆的纯粹性。
而高风给胡嘉然提供的是一种新的克隆方法，叫高通量设备自动化筛选，优点是人工干预少、通量大，其优势很明显，成本低，效率高，缺点则是对技术的要求比较高。
实验室里面的众人都没听说过这种方法，大家一脸的茫然。
“风哥，这个恐怕不行啊，你说的这个大家听都没听过，市面上也没有这种仪器卖。”胡嘉然给高风打电话，“我们研究了几天，真是没有头绪。”
“别慌，我现在就过去一趟。”高风没有着急，这个时候他也该亲自下场了。
“首先我们要构建一个自动化液体处理系统。”高风对一众科研民工讲道，“这种系统通常由多个液体处理单元组成，能够根据不同实验的需求，自动完成液体移液、混合等操作。自动化液体处理系统具有高精度、高速度、高可扩展性的特点，可以同时处理多个样品，能迅速提高筛选效率和准确性。”
“市面上暂时没有卖的，但咱们可以自己做一个，并不难，只需要把一些仪器集成到一块就行了。”他自信满满，这一步他在系统空间里面做过了，完全达到了系统的要求。
“这是图纸，你联系赵律师申请专利。还有，再买10台高速离心机.”临走的时候高风对胡嘉然交代道，“2周内把这个做出来，有编程和集成方面难题直接找专业人士，不要怕花钱，咱们不能再浪费时间了。”
胡嘉然压力挺大的，照目前的进度来看，三个月肯定是不行的，四个月能出来结果就烧高香了。
大家都忙的不行了，开工的时候买的发财树由于没人浇水，都已经枯死了。
看着全是黄叶的枯树，胡嘉然叹了口气，“不是说发财树耐旱吗？怎么就这么快死了呢？这兆头可不太好啊。”
“下班的时候找两个人给扔了吧。”
“发财树嘛，树死了，不就剩发财了吗？”王亮说道。
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